El Helicobacter pylori constituye uno de los principales agentes infecciosos a nivel mundial, y su participación en el aumento del número de casos de cáncer de estómago ha hecho necesaria la aplicación de nuevas técnicas como el PCR, que permitan su estudio.
Tema: Estandarización de la Reacción en Cadena de la Polimerasa para la tipificación de helicobacter pylori.
Objetivo: Presentar avances en la tipificación de aislamientos de Helicobacter pylori mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), utilizando como blancos de caracterización al gen de la toxina de vacuolización (Vac) y la isla de patogenicidad (Cag).
Muestra: Tejido ulcerado obtenido a partir de biopsia gástrica
Tipo de ácido nucleico: ADN bacteriano
Extracción del ADN:
Lisis: Suspensión de los cultivos en buffer tris EDTA, incubación con lisozima 200 mg/mL durante 2 horas a 37°C . Además, se adicionó dodecil sulfato de sodio (SDS) a una concentración final de 0,5% y proteinasa K 200 mg/mL, incubándose a 65°C por dos horas.
Separación: La solución obtenida fue mezclada con un igual volumen de fenol/cloroformo/alcohol isoamílico y sometida a centrifugación a 4500 rpm durante 15 minutos a 4°C.
Purificación: Precipitación con alcohol absoluto y resuspensión en agua tridestilada.
Tipo de PCR: Estándar
Genes a amplificar: VacA y CagA
Pasos:
D: 5min – 95°
H: 1,5min – 33°
E: 2min - 72°
Nro. de ciclos: 30
Visualización: EFO
Bibliografía:
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